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美天旎的磁珠分选技术历经30年的发展已经家喻户晓了，免疫学领域的你们一定不会陌生，可是你们在实验的时候是否也会被细胞纯度不高、活率不高或者是分选柱中液体流速慢等各种问题困扰呢？不用愁，咱们现在就来一起梳理一下。诺今生物
一）你要分选多少细胞呢？(诺今)
大家可以参考下表来选择合适的分选柱进行分选
分选柱 | 最大磁性细胞吸附量（cells） | 最大细胞上样量（cells） |
MS | 107 | 2×108 |
LS | 108 | 2×109 |
XS | 109 | 2×1010 |
LD | 108 | 5×108 |
CS | 2×108 | 109 |
D | 109 | 1011 |
※但是要留意哦！在分选CD133相关细胞时，最大细胞上样量和最大磁性细胞吸附量和上面是有较大差别的
分选柱 | 最大磁性细胞吸附量（cells） | 最大细胞上样量（cells） |
MS（阳选） | 107 | 2×107 |
LS（阳选） | 2×107 | 4×107 |
LD（阴选） | 1.5×107 | 3×107 |
二）什么情况下需要用到两个分选柱呢？(诺今)
有时为了在分选稀有细胞（表达频率＜5%）过程中得到更高的纯度，可以考虑使用使用两根分选柱：用其中一根分选柱做第一次分选，得到的阳性细胞再进行第二次分选。
三）有没有可以用于全血的分选柱呢？(诺今生物)
有的，目前有可以用于人全血的分选柱和分选磁珠，可以一次性分选0.25-15mL的全血，对于样本珍贵的各位实验达人来讲，有没有很给力呢！
四）如果我的细胞很大，可以有相应的分选方案推荐吗？(诺今)
我们有大细胞分选柱可以用于特殊的分选。比如可以用来分选植物细胞，原生动物或其他比较大的人或动物细胞，比如CD61磁珠可以用来分选巨核细胞或CD1a磁珠分选皮肤朗格汉斯细胞。
五）MS和LS分选柱只能用于阳性分选吗？(诺今生物)
这个不一定的，比如在抗原表达量比较高的情况下，如果是以回收率为优先考虑的话，是可以使用MS或LS进行阴性分选，如果是以纯度指标为优先考虑的话，要使用LD，CS或D柱进行阴性分选，如果各位小伙伴觉得会搞混的话，也不用担心，说明书上都会有明确的提示，大家严格按照提示操作就可以了。
六）分选后的细胞可以直接流式检测吗？
可以的，利用美天旎磁珠分选后的细胞表面抗原只占据了20-30%左右，还留有一大部分的抗原表位可以供流式抗体结合，所以是没有问题的。
七）俗话说，细节决定成败！注意实验细节有助于提高实验成功率哦，下面就为大家列举一些常见的磁珠分选的问题，快来围观吧！
待分选细胞中如有贴壁细胞，建议在分选前先贴壁培养去除，或者提高EDTA浓度，柱子堵了心也堵了。
抗体包被的磁珠对死细胞常有非特异性结合，因而分选前应看细胞活率并去除死细胞，我对纯度不满意，看看细胞活度吧。
新鲜分离骨髓细胞，先用胶原酶、DNA酶、胰酶联合消化，可使细胞团块解聚，得到更好的但细胞悬液，从而提高磁珠与细胞的结合效率及最终的分离效率，提高纯度和得率。
上分离柱前，充分振荡，混悬细胞，打散细胞团块，使之分散成单细胞悬液，过滤一下很重要。
用分离柱分选时，应用真空抽滤水；滴加细胞悬液或洗液时也应注意轻柔滴入，减少气泡的产生，避免分离柱被气泡阻滞影响流出速度，重复使用分选柱，这种方式要不得。
细胞悬液加入分离柱中时，应将滴管伸至底壁后加入，不要将细胞悬液沿管壁流入，使分选前的细胞残留在管壁上，导致后继洗柱过程中，因疏忽未被洗下，最后导致纯度不高。洗柱时，应在前次液体充分流尽后，再加洗液。
分选细胞量应根据说明书控制，不超量，超量只会更苦恼。
孵育时间和温度应按说明书进行，延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合。
先用抗体阻断Fc受体，可降低非特异性结合，分选效果棒棒哒。
最后为大家梳理一下美天旎磁珠分选的策略，希望对磁珠小伙伴们有帮助
如果想从PBMC中分选CD4阳性细胞，那就直接利用CD4磁珠和样本孵育，过柱分选就可以得到CD4细胞啦，so easy！
如果不想你的样本中有CD4细胞，那就用磁珠标记它，只收集除CD4以外的阴性组分就好啦！
如果不想你的CD4细胞标记有磁珠，那就让除CD4以外的细胞都标记上磁珠吧！
如果想要两个标记一起分选怎么办？那就先阴性分选第一个标记，再阳性分选第二个标记吧！其实目标细胞只被磁珠结合过一次哦
如果找不到第一步可以阴选的方法，如何实现双阳细胞的分选呢？你可以先标记一个可剪切的磁珠，切掉后再标记第二个磁珠就好啦！就是这么容易！
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